低温研磨仪是一种利用低温技术将样品冷冻至脆化点以下,再通过机械力(如撞击、摩擦)进行研磨的专业设备,广泛应用于生物医学、材料科学、食品检测等领域。
1.低温脆化:通过液氮或空气制冷将样品冷却至-50℃至-196℃,使韧性物质(如植物组织、橡胶)脆化。
2.机械研磨:
- 电磁振荡/振动驱动:通过电磁振荡或垂直上下振动等方式,驱动研磨珠在密闭研磨罐内高频往复运动,对样品施加撞击、剪切和混合作用,实现粉碎。
- 多维运动结合:部分设备采用垂直方向及左右径向振动,利用研磨珠的惯性撞击罐壁样品,同时结合罐体旋转增强摩擦力,提升研磨效果。
3.温度控制与维持:仪器配备压缩机制冷或液氮自动注入系统,确保研磨过程中温度稳定在超低温范围(如-196℃),防止样品因摩擦生热降解,尤其适用于热敏性物质。
低温研磨仪的测定步骤:
1.准备工作:将制冷模块预先置于 -20℃。把研磨珠进行去 RNA 酶处理。准备好合适的离心管,如无 RNA 酶的 2ml 研磨单位离心管(若选择 1.5ml 研磨单位离心管,需注意调整研磨珠数量)。
2.样本处理:随机抽取适量样本,如小鼠尾巴 100μg,把样本剪成尽可能小的段,置于上述离心管中。同时加入相应数量的研磨珠,如 1 颗 5 号研磨珠和 2 颗 3 号研磨珠(1.5ml 离心管加 4-5 颗 3 号研磨珠)。
3.低温处理:将装有样本和研磨珠的离心管放置于液氮中一起浸泡 3 分钟。
4.安装与研磨设置:取出离心管,迅速安装到预冷模块上,并在低温研磨机上选择合适的参数,如选择 13 单位频振研磨 60s(可根据研磨要求重复此步骤)。
5.添加试剂与二次研磨:研磨好后,向离心管中加入适量的提取液,如 PBS 或 RNAiso Plus 等,继续置于低温研磨机上选择相同或其他合适的参数进行二次研磨,使样本呈糊状。
6.后续处理:取出研磨管,放入冷冻离心机中,在 4℃、12000g 条件下离心 10 分钟。之后小心吸取上清液至新的离心管中,根据实验需求进行孵育、添加氯仿、再次离心、转移上清层、加入异丙醇孵育、离心、洗涤沉淀等一系列操作,以获取目标物质,如 RNA 等。